Mts1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422782
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Mts1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Mts1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Mts1 Anticuerpo (X9-7): sc-100784
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Mts1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422782 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino S100a4 codifica Mts1, una proteína de la familia S100 que se une al calcio y modula la dinámica del citoesqueleto, la motilidad celular y las interacciones célula–matriz mediante la regulación dependiente de calcio de la remodelación de actina y de las redes de señalización asociadas. Mts1 se asocia a procesos como la transición epitelio–mesénquima, la activación de fibroblastos y el tráfico de células inmunitarias, con conexiones descritas con vías que incluyen la señalización de GTPasas Rho y la remodelación de la matriz extracelular. La expresión alterada de S100a4/Mts1 se utiliza con frecuencia como un indicador molecular de estados celulares invasivos y promigratorios, y se estudia en modelos de remodelación tisular asociada a la inflamación y de biología tumoral. En sistemas murinos, S100a4 también se emplea para investigar la comunicación cruzada entre estroma e inmunidad y las contribuciones específicas de linaje a la remodelación patológica.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Mts1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen S100a4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del S100a4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de S100a4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Mts1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en S100a4 para la investigación de la señalización de Mts1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de S100a4 críticos para la función de Mts1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de S100a4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Mts1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Mts1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus S100a4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Mts1 (m) y el plásmido HDR Mts1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología S100a4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana S100a4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.