Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mts1 (m): sc-422782
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Mts1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Mts1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Mts1 Antibody (X9-7): sc-100784
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mts1 (m) | sc-422782 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin S100a4 code Mts1, une protéine de la famille S100 liant le calcium, qui module la dynamique du cytosquelette, la motilité cellulaire et les interactions cellule–matrice via une régulation, dépendante du calcium, du remodelage de l’actine et des réseaux de signalisation associés. Mts1 est impliquée dans des processus tels que la transition épithélio-mésenchymateuse, l’activation des fibroblastes et le trafic des cellules immunitaires, avec des liens rapportés avec des voies impliquant la signalisation des GTPases Rho et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une expression altérée de S100a4/Mts1 est fréquemment utilisée comme marqueur moléculaire d’états cellulaires invasifs et pro-migratoires, et elle est étudiée dans des modèles de remodelage tissulaire associé à l’inflammation ainsi que dans des modèles de biologie tumorale. Dans les systèmes murins, S100a4 est également utilisé pour explorer le dialogue stroma–système immunitaire et les contributions spécifiques de lignées cellulaires au remodelage pathologique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mts1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène S100a4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du S100a4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert S100a4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mts1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en S100a4 pour l'étude de la signalisation de Mts1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de S100a4 essentiels à la fonction de Mts1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de S100a4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Mts1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Mts1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus S100a4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Mts1 plasmide HDR (m) et le Mts1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie S100a4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles S100a4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.