Plásmido CRISPR de Activación (m) MTMR2: sc-429507-ACT

Mtmr2 codifica MTMR2, una fosfatasa 3 de fosfoinosítidos que desfosforila PI3P y PI(3,5)P2 para regular el tráfico endosomal, la remodelación de membranas y la señalización dependiente de fosfoinosítidos. En células de ratón, MTMR2 contribuye al control de la dinámica de vesículas y a la organización del citoesqueleto, lo que influye en el recambio de receptores y el transporte intracelular. La actividad alterada de MTMR2 perturba la homeostasis endolisosomal y programas celulares relacionados con la mielina, vinculando las vías asociadas a MTMR2 con fenotipos de neuropatía periférica. Estas funciones hacen de Mtmr2 un nodo útil para estudiar el metabolismo de los fosfoinosítidos y su impacto en las redes de tráfico de membranas en sistemas neurales y no neurales.

MTMR2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mtmr2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MTMR2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mtmr2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mtmr2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MTMR2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mtmr2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MTMR2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MTMR2 en células tumorales con expresión de Mtmr2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.