Plásmido CRISPR de Activación (h) MTA1: sc-400942-ACT

La MTA1 humana (metastasis associated 1) es un factor regulador de la cromatina, más conocido como componente central del complejo NuRD (remodelación de nucleosomas y desacetilación). Este complejo vincula la remodelación de la cromatina dependiente de ATP con la desacetilación de histonas para modular programas transcripcionales. Mediante interacciones con HDAC1/2, CHD3/4 y otras subunidades de NuRD, MTA1 influye en el control epigenético de la expresión génica, las respuestas al daño del ADN y las transiciones de estado celular, como la plasticidad epitelio-mesenquimal. MTA1 se ha estudiado en vías que gobiernan la proliferación, la migración y la señalización de estrés, y su expresión alterada se asocia con frecuencia a fenotipos tumorales agresivos y comportamiento metastásico en múltiples tipos de cáncer. Su papel en la reorganización de la accesibilidad de potenciadores (enhancers) y promotores la convierte en una diana útil para desentrañar redes transcripcionales que acoplan el estado de la cromatina con la señalización oncogénica e inflamatoria.

MTA1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MTA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MTA1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MTA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MTA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MTA1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MTA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MTA1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MTA1 en células tumorales con expresión de MTA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.