Plasmide Double Nickase (h) MT-MMP-1: sc-401028-NIC

MMP14 code la métalloprotéinase matricielle de type membranaire 1 (MT‑MMP‑1), une endopeptidase transmembranaire qui pilote le remodelage péricellulaire de la matrice extracellulaire en clivant le collagène et d’autres substrats matriciels, et en activant le pro‑MMP2. En localisant la protéolyse à la surface cellulaire, MT‑MMP‑1 coordonne la migration invasive, le renouvellement des adhésions focales et la morphogenèse tissulaire via une signalisation liée aux intégrines et des signaux dérivés de la matrice qui s’entrecroisent avec des voies telles que le TGF‑β et les programmes de réponse à l’hypoxie. Une activité dérégulée de MMP14 a été associée à un remodelage stromal altéré, à une augmentation de la motilité cellulaire et à des modifications du microenvironnement angiogénique observées dans des contextes fibrosants et tumoraux. Ces propriétés font de MMP14 un nœud central pour étudier l’invasion dépendante des protéases et la signalisation de la matrice dans des modèles cellulaires humains.

MT-MMP-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MMP14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MMP14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MMP14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MMP14.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.