Plasmide CRISPR/Cas9 KO MSR (h): sc-409650

Présentation

Le gène humain **MTRR** code la méthionine synthase réductase (MSR), une oxydoréductase dépendante du FAD/NADPH qui restaure l’activité catalytique de la méthionine synthase par réactivation réductrice de son cofacteur cobalamine. Par ce rôle, la MSR soutient le métabolisme à un carbone, en reliant les cycles des folates et de la méthionine aux réactions de méthylation dépendantes de la S-adénosylméthionine ainsi qu’à la reméthylation de l’homocystéine. Une perturbation de **MTRR** dérègle la maintenance redox-dépendante des enzymes et peut modifier la capacité de méthylation cellulaire, la biosynthèse des nucléotides et les réponses au stress métabolique. Des variations génétiques ou une altération de la fonction de la MSR ont été associées à une gestion perturbée de l’homocystéine et à des phénotypes métaboliques liés aux folates, pertinents pour des études en biologie du développement et sur le risque cardiométabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MSR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MTRR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MTRR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MTRR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MSR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MTRR pour l'étude de la signalisation de MSR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MTRR essentiels à la fonction de MSR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MTRR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MSR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MSR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MTRR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MSR plasmide HDR (h) et le MSR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MTRR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MTRR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.