Plásmido CRISPR de Activación (h) MSMP: sc-418716-ACT

El MSMP humano (microseminoproteína, también conocida como PSP94) codifica una proteína secretada, regulada por andrógenos, que se expresa en niveles elevados en el tejido prostático y se libera en fluidos extracelulares. MSMP está implicado en la homeostasis epitelial y en la señalización paracrina dentro del microambiente prostático, con conexiones descritas con programas transcripcionales sensibles a hormonas y con procesos inflamatorios o inmunomoduladores. La alteración de la expresión de MSMP se ha asociado con la fisiopatología prostática y la biología tumoral, lo que lo hace relevante para estudios de señalización androgénica, estado de diferenciación y regulación por el microambiente. Dado que MSMP se secreta, también es útil para investigar la función de proteínas extracelulares, la dinámica de secreción y redes reguladoras vinculadas a biomarcadores.

MSMP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MSMP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MSMP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MSMP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MSMP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MSMP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MSMP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MSMP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MSMP en células tumorales con expresión de MSMP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.