Plásmido CRISPR de Activación (h) Msi1: sc-404014-ACT

MSI1 codifica la proteína 1 de unión a ARN Musashi (Msi1), un regulador postranscripcional conservado que se une a motivos de secuencia en ARNm diana para modular la traducción, la estabilidad y las decisiones de destino celular. En células humanas, Msi1 favorece el mantenimiento de células madre/progenitoras e influye en los programas de diferenciación al moldear las salidas de señalización en vías como Notch y Wnt/β-catenina, así como redes más amplias de procesamiento de ARN que controlan la proliferación y el compromiso de linaje. La expresión aberrante de MSI1 se ha vinculado con crecimiento desregulado y estados de diferenciación alterados en múltiples contextos patológicos, lo que la convierte en un marcador útil y en un punto de entrada mecanístico para estudiar circuitos transcripcionales y translacionales de tipo oncogénico. Como proteína de unión a ARN, Msi1 también es relevante para investigaciones sobre respuestas al estrés y regulación asociada a gránulos de ARN, que pueden reconfigurar la expresión génica sin alterar la secuencia de ADN.

Msi1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MSI1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Msi1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MSI1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MSI1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Msi1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MSI1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Msi1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Msi1 en células tumorales con expresión de MSI1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.