Plásmido Doble Nickase (h) MSH2: sc-400966-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)MSH2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MSH2 (h) y el plásmido de doble nickasa MSH2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MSH2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MSH2 Anticuerpo (D-6): sc-376384
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) MSH2 | sc-400966-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) MSH2 | sc-400966-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MSH2 codifica un componente central de la maquinaria de reparación de errores de apareamiento del ADN (MMR) que reconoce desajustes base–base y bucles de inserción/deleción que surgen durante la replicación y la recombinación del ADN. Como parte de los complejos MutSα (MSH2–MSH6) y MutSβ (MSH2–MSH3), MSH2 inicia el procesamiento de las lesiones, acoplando el reconocimiento del desajuste con la escisión y la resíntesis, preservando así la estabilidad del genoma. La función de MSH2 se entrecruza con la señalización de la respuesta al daño del ADN e influye en los resultados del estrés replicativo y en las tasas de mutación. La alteración de la actividad de MSH2 se asocia estrechamente con la inestabilidad de microsatélites y con fenotipos hipermutadores ampliamente estudiados en la biología tumoral hereditaria y esporádica.
MSH2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MSH2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MSH2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MSH2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MSH2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.