Plásmido CRISPR de Activación (h) MS4A6A: sc-417401-ACT

MS4A6A codifica un miembro de la familia MS4A (membrane-spanning 4A), un grupo de proteínas tipo tetraspanina enriquecidas en linajes hematopoyéticos y mieloides. MS4A6A se utiliza con frecuencia como marcador de estados de activación de microglía y macrófagos, y se ha implicado en la organización de membrana y en la regulación de complejos de señalización en la superficie celular que moldean las respuestas inmunitarias innatas. La expresión de MS4A6A se correlaciona con programas inflamatorios y con vías relacionadas con la activación de células inmunitarias, la función fagocítica y estados transcripcionales impulsados por citocinas. Se ha asociado la alteración de la expresión de MS4A6A con fenotipos vinculados a la neuroinflamación, y se estudia comúnmente en el contexto de la genética de enfermedades neurodegenerativas y la biología de la microglía.

MS4A6A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MS4A6A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MS4A6A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MS4A6A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MS4A6A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MS4A6A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MS4A6A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MS4A6A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MS4A6A en células tumorales con expresión de MS4A6A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.