MRVI1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411458

Übersicht

MRVI1 (murine retrovirus integration site 1 homolog) kodiert ein zytoplasmatisches Gerüstprotein (Scaffold), das die Stickstoffmonoxid/cGMP-Signalübertragung mit der intrazellulären Calciumregulation koppelt, insbesondere durch die Interaktion mit ITPR1 und die Modulation der IP3-Rezeptor-abhängigen Ca2+-Freisetzung. Es ist am PKG-Signalweg beteiligt und trägt zur Relaxation glatter Muskulatur, zur Thrombozytenfunktion sowie allgemein zur Kontrolle Ca2+-getriebener Signaldynamiken bei. MRVI1-abhängige Signalübertragung beeinflusst zelluläre Prozesse wie Kontraktion, Sekretion und Erregbarkeit, indem sie die Integration von Second Messengern am endoplasmatischen Retikulum fein abstimmt. Eine Fehlregulation MRVI1-assoziierter Ca2+- und cGMP-Signalwege wurde mit kardiovaskulären und hämatologischen Phänotypen in Verbindung gebracht und ist relevant für mechanistische Studien zu Signalveränderungen, wie sie bei Krebs und anderen komplexen Erkrankungen beobachtet werden.

Das MRVI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MRVI1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MRVI1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MRVI1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MRVI1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MRVI1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MRVI1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MRVI1-Exone abzielen, die für die MRVI1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MRVI1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MRVI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MRVI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MRVI1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MRVI1 HDR-Plasmid (h) und MRVI1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MRVI1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MRVI1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.