Plasmide Double Nickase (h) MRP6: sc-402219-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MRP6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MRP6 Double Nickase (h) et le plasmide MRP6 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ABCC6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MRP6 Antibody (M6II-31): sc-59618
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MRP6 | sc-402219-NIC | 20 µg | $410.00 |
ABCC6 code le transporteur humain de la famille ATP-binding cassette MRP6, une pompe d’efflux membranaire principalement impliquée dans la régulation de l’homéostasie extracellulaire des nucléotides et du pyrophosphate. En influençant la libération d’ATP et sa conversion en aval en pyrophosphate inorganique, MRP6 contribue à moduler les voies de minéralisation et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une activité altérée d’ABCC6 est fortement associée à des phénotypes de calcification ectopique et à des atteintes du tissu conjonctif, notamment le pseudoxanthome élastique, et a été étudiée dans des contextes de biologie vasculaire et dermique. Ces fonctions relient ABCC6 à la signalisation purinergique au sens large, au métabolisme minéral et au contrôle, médié par des transporteurs, des microenvironnements tissulaires.
MRP6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ABCC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ABCC6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ABCC6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ABCC6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.