Plasmide CRISPR d'Activation (h) MRP2: sc-400601-ACT

ABCC2 code la protéine 2 associée à la résistance aux médicaments (MRP2), un transporteur d’efflux de la famille des transporteurs ABC (ATP-binding cassette), principalement localisé à la membrane apicale des cellules épithéliales polarisées telles que les hépatocytes, les entérocytes et les cellules du tubule proximal rénal. MRP2 exporte une large gamme d’anions endogènes et xénobiotiques, notamment des conjugués au glutathion, au glucuronide et au sulfate, soutenant la détoxification de phase II et la formation de la bile au sein des voies de transport hépatobiliaires. En contrôlant l’efflux cellulaire de métabolites conjugués, MRP2 contribue à la gestion du stress oxydatif et au maintien de l’homéostasie chimique dans les tissus barrières. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ABCC2 ont été associées à des défauts d’excrétion biliaire et à une variabilité du devenir des composés conjugués, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie hépatique et épithéliale.

MRP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MRP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MRP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MRP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MRP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.