MRNIP Double Nickase Plasmid (h): sc-412131-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MRNIP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MRNIP Double-Nickase-Plasmid (h) und MRNIP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MRNIP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MRNIP: sc-390012
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MRNIP Double Nickase Plasmid (h) | sc-412131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRNIP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-412131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MRNIP (MRE11-RAD50-NBS1-interagierendes Protein) ist ein nukleärer Faktor, der über eine funktionelle Assoziation mit dem MRN-Komplex an der DNA-Schadensantwort beteiligt ist; dieser koordiniert die Erkennung und Verarbeitung von DNA-Doppelstrangbrüchen. Durch die Modulation der MRN-abhängigen Signalgebung und der Dynamik der Endresektion trägt MRNIP zur Genomstabilität unter Replikationsstress bei und beeinflusst die Checkpoint-Aktivierung sowie die Wahl des Reparaturwegs. Störungen von Komponenten des MRN-Signalwegs sind breit mit Phänotypen chromosomaler Instabilität und einer veränderten Empfindlichkeit gegenüber genotoxischen Stressoren verknüpft, wodurch MRNIP einen nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Organisation von DNA-Reparaturnetzwerken darstellt. Die MRNIP-Forschung ist relevant für Mechanismen, die der Mutationsakkumulation, Aneuploidie und Zellzyklusdefekten zugrunde liegen, wie sie in unterschiedlichen Krankheitskontexten beobachtet werden.
MRNIP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MRNIP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MRNIP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MRNIP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MRNIP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.