Plásmido CRISPR de Activación (m) Mrf-1: sc-431969-ACT

Arid5a (también conocido como Mrf-1) codifica una proteína reguladora de unión a ARN que modula el control posranscripcional de la expresión de genes inflamatorios. En células de ratón, Arid5a estabiliza transcritos selectos de citocinas y de respuesta inmunitaria y contrarresta las vías de degradación del ARNm, dando forma a las salidas de señalización aguas abajo de la activación inmunitaria innata y de las respuestas al estrés. Este eje regulador se interseca con programas transcripcionales y de metabolismo del ARN más amplios que influyen en los estados de diferenciación y en la dinámica de activación celular. La actividad desregulada de Arid5a se ha implicado en la fisiopatología inflamatoria y en el daño tisular mediado por el sistema inmunitario, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de redes de citocinas y de señalización inflamatoria.

Mrf-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Arid5a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mrf-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Arid5a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Arid5a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mrf-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Arid5a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mrf-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mrf-1 en células tumorales con expresión de Arid5a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.