Plásmido CRISPR de Activación (h2) Mrf-1: sc-406689-ACT-2

El ARID5A (Mrf-1) humano codifica un regulador de unión a ARN que contiene un dominio de interacción rico en AT y que modula la expresión de genes inflamatorios al estabilizar ARNm de citocinas selectas, incluida IL6, configurando así las respuestas inmunitarias innata y adaptativa. ARID5A integra señales aguas abajo de las vías TLR/IL-1R y NF-κB y contrarresta los programas de degradación mediada por RNasas para controlar la magnitud y la duración de la activación inmunitaria. La actividad desregulada de ARID5A se ha vinculado a una producción aberrante de citocinas y a patología impulsada por el sistema inmunitario en contextos como la autoinmunidad, la inflamación crónica y la inflamación asociada a tumores. La edición génica de ARID5A facilita estudios mecanísticos del control postranscripcional, la diferenciación y activación de células inmunitarias, y el mapeo de vías de redes de citocinas en modelos celulares humanos.

Mrf-1 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARID5A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mrf-1 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARID5A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARID5A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mrf-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARID5A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mrf-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mrf-1 en células tumorales con expresión de ARID5A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.