Plásmido CRISPR de Activación (h) MREG: sc-405725-ACT

El MREG humano (melanoregulina) codifica una proteína pequeña asociada a membrana, implicada en la biogénesis de melanosomas y el transporte de gránulos de pigmento, influyendo en la maduración y distribución de orgánulos relacionados con los lisosomas. MREG participa en procesos de tráfico intracelular que se entrecruzan con la dinámica endosomal-lisosomal y el transporte mediado por el citoesqueleto, modelando el posicionamiento de los orgánulos y el manejo de la carga. Debido a sus funciones en la biología de la pigmentación y la homeostasis de orgánulos, la actividad alterada de MREG es relevante para estudios de fenotipos pigmentarios y de defectos más amplios en vías de transporte vesicular. Estas funciones hacen de MREG un punto de interés útil para diseccionar mecanismos de maduración de orgánulos, clasificación de carga y respuestas celulares a perturbaciones del tráfico.

MREG El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MREG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MREG El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MREG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MREG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MREG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MREG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MREG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MREG en células tumorales con expresión de MREG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.