MRCKγ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406697
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MRCKγ El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MRCKγ, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MRCKγ Anticuerpo (2C3): sc-517148
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MRCKγ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406697 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CDC42BPG codifica la quinasa gamma relacionada con la quinasa de distrofia miotónica unida a Cdc42 (MRCKγ), una quinasa de serina/treonina que actúa aguas abajo de la GTPasa Rho CDC42 para coordinar la contractilidad actina–miosina. MRCKγ fosforila reguladores del citoesqueleto, como la cadena ligera de la miosina y sustratos relacionados, para modular la tensión cortical, la polaridad celular y la migración direccional. A través de estas actividades contribuye a redes de señalización dependientes de Rho/CDC42 que modelan la dinámica de adhesión, la morfogénesis y el comportamiento invasivo. La desregulación de la señalización de la familia MRCK se ha vinculado con una remodelación citosquelética alterada en contextos relevantes para la motilidad de células tumorales y la diseminación metastásica, así como con trastornos más amplios de la arquitectura celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MRCKγ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDC42BPG en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDC42BPG junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDC42BPG tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MRCKγ.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDC42BPG para la investigación de la señalización de MRCKγ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CDC42BPG críticos para la función de MRCKγ
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDC42BPG para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MRCKγ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MRCKγ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDC42BPG. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MRCKγ (h) y el plásmido HDR MRCKγ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDC42BPG para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDC42BPG definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.