Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRCKβ (h): sc-403169
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MRCKβ Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MRCKβ, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MRCKβ Antibody (C-12): sc-374597
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRCKβ (h) | sc-403169 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CDC42BPB code MRCKβ (myotonic dystrophy kinase-related Cdc42-binding kinase bêta), une kinase sérine/thréonine qui agit en aval de la GTPase Rho CDC42 pour coordonner la contractilité actine–myosine. MRCKβ phosphoryle des régulateurs du cytosquelette, notamment la chaîne légère de la myosine, et influence la polarité cellulaire, la formation de lamellipodes et la migration directionnelle via des réseaux de signalisation apparentés à Rho/ROCK. Ces activités relient CDC42BPB à des voies contrôlant la dynamique d’adhésion, la morphogenèse et le trafic vésiculaire, des processus fréquemment perturbés dans les phénotypes invasifs et métastatiques. Des altérations de la signalisation de MRCKβ ont été étudiées dans le contexte de la motilité des cellules tumorales et d’autres troubles impliquant une dérégulation du cytosquelette.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRCKβ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDC42BPB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDC42BPB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDC42BPB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRCKβ.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDC42BPB pour l'étude de la signalisation de MRCKβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CDC42BPB essentiels à la fonction de MRCKβ
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDC42BPB pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MRCKβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MRCKβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDC42BPB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MRCKβ plasmide HDR (h) et le MRCKβ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDC42BPB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDC42BPB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.