Particules Lentivirales d'Activation (m2) mPRε: sc-429117-LAC-2

Chez la souris, Paqr9 code le récepteur membranaire de la progestérone epsilon (mPRε), une protéine de la famille PAQR à sept domaines transmembranaires impliquée dans la signalisation rapide, non génomique, de la progestérone à la membrane plasmique. On pense que mPRε module des cascades de seconds messagers de type RCPG, notamment via la régulation de l’AMPc et de la dynamique du calcium intracellulaire, influençant ainsi des programmes de signalisation cellulaire liés à la sensibilité aux hormones stéroïdiennes. L’expression de Paqr9 a été associée à la physiologie neuroendocrinienne et reproductive, et les altérations de la signalisation liée à la progestérone sont pertinentes pour l’étude de la fertilité, de la régulation de l’axe du stress et de la biologie des tumeurs hormono‑dépendantes. L’édition génétique de Paqr9 dans des modèles murins permet d’analyser les mécanismes des voies stéroïdiennes initiées à la membrane, le dialogue entre récepteurs avec la signalisation du récepteur nucléaire de la progestérone, ainsi que les adaptations transcriptionnelles et métaboliques en aval dans des tissus ou types cellulaires définis.

Les particules d'activation lentivirales mPRε (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Paqr9 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales mPRε (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Paqr9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de mPRε. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Paqr9 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.