Partículas Lentivirales de Activación (m2) mPRε: sc-429117-LAC-2

El gen Paqr9 del ratón codifica el receptor de progesterona de membrana épsilon (mPRε), una proteína de siete dominios transmembrana de la familia PAQR implicada en la señalización rápida y no genómica de la progesterona en la membrana plasmática. Se cree que mPRε modula cascadas de segundos mensajeros de tipo GPCR, incluida la regulación del AMPc y de la dinámica del calcio intracelular, influyendo así en programas de señalización celular vinculados a la respuesta a hormonas esteroideas. La expresión de Paqr9 se ha asociado con la fisiología neuroendocrina y reproductiva, y la alteración de la señalización relacionada con la progesterona es relevante para estudios sobre fertilidad, regulación del eje del estrés y biología de tumores dependientes de hormonas. La edición genética de Paqr9 en modelos murinos permite el análisis mecanístico de las vías esteroideas iniciadas en la membrana, la comunicación cruzada del receptor con la señalización del receptor nuclear de progesterona y las adaptaciones transcripcionales y metabólicas posteriores en tejidos o tipos celulares definidos.

Las partículas de activación lentiviral mPRε (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Paqr9 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral mPRε (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Paqr9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de mPRε. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Paqr9 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.