Plásmido CRISPR de Activación (m2) mPRε: sc-429117-ACT-2

El gen Paqr9 del ratón codifica el receptor de progesterona de membrana épsilon (mPRε), un miembro de la familia PAQR implicado en la señalización rápida y no genómica de la progesterona en las membranas celulares. Se cree que mPRε modula las salidas de señalización acopladas a proteínas G, influyendo en vías de segundos mensajeros como el AMPc y la dinámica del calcio, que determinan la proliferación celular, la diferenciación y las respuestas al estrés en tejidos sensibles a hormonas. La desregulación de las redes de señalización esteroidea asociadas a Paqr9 se ha vinculado con alteraciones de la fisiología reproductiva y neuroendocrina, y se investiga en contextos que incluyen la biología de tumores dependientes de hormonas y la inflamación metabólica. Los estudios de edición genética y genómica funcional dirigidos a Paqr9 respaldan el análisis mecanístico de las vías sensibles a la progesterona, la comunicación cruzada entre receptores y los programas de señalización específicos de cada tipo celular en modelos murinos y sistemas celulares modificados.

mPRε El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Paqr9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

mPRε El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Paqr9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Paqr9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de mPRε. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Paqr9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de mPRε en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía mPRε en células tumorales con expresión de Paqr9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.