Plásmido CRISPR de Activación (h) mPRβ: sc-403374-ACT

PAQR8 codifica el receptor de progesterona de membrana beta (mPRβ), un receptor de progestágenos de siete dominios transmembrana de la familia PAQR que media la señalización rápida y no genómica de la progesterona en la membrana plasmática. mPRβ se ha vinculado a la regulación de vías de segundos mensajeros, como la modulación de AMPc acoplada a Gi/o y la señalización de quinasas aguas abajo, lo que influye en el control del ciclo celular, la diferenciación y programas transcripcionales sensibles al estrés. En tejidos humanos, la expresión de PAQR8 se ha estudiado en contextos reproductivos y endocrinos, donde la señalización dependiente de progesterona se intersecta con redes de hormonas esteroideas y la comunicación cruzada entre receptores de membrana. La desregulación de la señalización de progesterona y la expresión alterada de receptores de la familia PAQR se evalúan con frecuencia en biología sensible a hormonas, incluidos modelos de trastornos reproductivos y de remodelación de vías asociada al cáncer, lo que respalda a PAQR8 como diana para estudios mecanísticos de la dinámica de la señalización esteroidea.

mPRβ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PAQR8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

mPRβ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PAQR8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PAQR8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de mPRβ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PAQR8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de mPRβ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía mPRβ en células tumorales con expresión de PAQR8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.