Plasmide CRISPR/Cas9 KO mPRα (h): sc-402143

Présentation

PAQR7 code le récepteur membranaire de la progestérone alpha (mPRα), un récepteur aux progestatifs à sept domaines transmembranaires de la famille PAQR, qui médie une signalisation rapide de la progestérone, non génomique, au niveau de la membrane plasmique et des membranes intracellulaires. mPRα influence des processus cellulaires tels que la signalisation par les nucléotides cycliques, les cascades de kinases, les flux de calcium, ainsi que la régulation de l’apoptose et de la motilité cellulaire, avec des effets dépendants du contexte sur les programmes transcriptionnels via des voies de seconds messagers en aval. L’expression de PAQR7 a été rapportée dans des tissus reproducteurs et non reproducteurs, étayant des rôles dans la sensibilité aux hormones stéroïdes, la régulation neuroendocrinienne et la signalisation immune et épithéliale. Une signalisation mPRα dérégulée a été étudiée en biologie hormono-réactive et dans des contextes pertinents pour les maladies, tels que des troubles de la reproduction et des modèles de cancers associés aux hormones, où une réponse altérée à la progestérone peut affecter la prolifération, l’invasion et les voies d’adaptation au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mPRα (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PAQR7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PAQR7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PAQR7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mPRα.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PAQR7 pour l'étude de la signalisation de mPRα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PAQR7 essentiels à la fonction de mPRα
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PAQR7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le mPRα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le mPRα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PAQR7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le mPRα plasmide HDR (h) et le mPRα (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PAQR7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PAQR7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.