Plásmido CRISPR de Activación (h) mPRα: sc-402143-ACT

PAQR7 codifica el receptor de progesterona de membrana alfa (mPRα), un miembro de la familia PAQR implicado en la señalización rápida y no genómica de la progesterona en las membranas celulares. mPRα se ha relacionado con la modulación de la señalización acoplada a proteínas G, incluidas la dinámica del AMPc y las vías de quinasas aguas abajo que influyen en programas de proliferación, diferenciación y supervivencia celular. En tejidos humanos, la expresión de PAQR7 se asocia con la regulación endocrina y con estados celulares sensibles a esteroides, lo que lo hace relevante para estudiar redes transcripcionales dependientes de hormonas y el diálogo cruzado con la señalización iniciada en la membrana. Las vías de señalización de la progesterona desreguladas que involucran a PAQR7 se han investigado en el contexto de la biología reproductiva y de mecanismos de enfermedad asociados a hormonas, lo que respalda su uso como diana de investigación en estudios de señalización celular y genómica funcional.

mPRα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PAQR7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

mPRα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PAQR7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PAQR7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de mPRα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PAQR7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de mPRα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía mPRα en células tumorales con expresión de PAQR7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.