MPP3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420007

Descripción general

Mpp3 codifica la proteína de membrana palmitoilada 3 (MPP3), un miembro de la familia MAGUK de proteínas andamiaje que organizan complejos multiproteicos en la membrana plasmática. MPP3 contribuye a la polaridad celular y a la arquitectura de las uniones al conectar socios transmembrana con componentes del citoesqueleto y de señalización a través de sus dominios PDZ, SH3 y tipo guanilato quinasa. En tejidos de ratón, MPP3 está implicada en la organización epitelial y en procesos de tráfico vesicular/de membrana que influyen en la diferenciación y en las funciones de barrera. La desregulación de los andamiajes MAGUK se asocia de forma amplia con alteraciones de la señalización dependiente de la adhesión y con la desorganización tisular, lo que convierte a Mpp3 en una diana útil para estudiar mecanismos relevantes para el desarrollo y para cambios en la arquitectura celular asociados a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MPP3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mpp3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mpp3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mpp3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MPP3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mpp3 para la investigación de la señalización de MPP3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mpp3 críticos para la función de MPP3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mpp3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MPP3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MPP3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mpp3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MPP3 (m) y el plásmido HDR MPP3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mpp3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mpp3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.