MOR-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401224

Descripción general

OPRM1 codifica el receptor μ-opioide humano MOR-1, un GPCR acoplado a Gi/Go que se une a péptidos opioides endógenos y a ligandos opioides exógenos para regular la excitabilidad neuronal y la liberación de neurotransmisores. La señalización de MOR-1 inhibe la adenilil ciclasa, modula las vías de cAMP/PKA, activa las cascadas MAPK/ERK e influye en la actividad de los canales iónicos, configurando así la transmisión sináptica en circuitos de dolor, recompensa y estrés. La activación del receptor promueve el reclutamiento de β-arrestina, la desensibilización y el tráfico del receptor, vinculando a MOR-1 con la internalización del receptor y con respuestas adaptativas de señalización. Las alteraciones en la función o la regulación de OPRM1 se han asociado con diferencias interindividuales en la respuesta analgésica, fenotipos relacionados con el consumo de sustancias y rasgos neuropsiquiátricos, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos en neurobiología y farmacología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MOR-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen OPRM1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del OPRM1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de OPRM1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MOR-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en OPRM1 para la investigación de la señalización de MOR-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de OPRM1 críticos para la función de MOR-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de OPRM1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MOR-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MOR-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus OPRM1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MOR-1 (h) y el plásmido HDR MOR-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología OPRM1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana OPRM1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.