Plasmide CRISPR d'Activation (h) MOB1A: sc-407966-ACT

Le gène humain **MOB1A** code l’activateur de kinase MOB1A, un cofacteur central de la cascade de signalisation Hippo qui se lie aux kinases **LATS1/2** et les active afin de limiter les programmes transcriptionnels dépendants de **YAP/TAZ**. Par cette voie, MOB1A contribue au contrôle de la progression du cycle cellulaire, de l’apoptose, de la polarité épithéliale et de l’inhibition de contact, en intégrant des signaux issus de la dynamique du cytosquelette et des jonctions intercellulaires. Une régulation altérée de la voie Hippo et une activité YAP/TAZ déréglée sont largement impliquées dans la transformation oncogénique, les métastases et une croissance tissulaire aberrante, faisant de MOB1A un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la prolifération et de la différenciation. La fonction de MOB1A est également étudiée dans des contextes de réponse au stress et d’homéostasie de la taille des organes, où un réglage fin des sorties transcriptionnelles est nécessaire.

MOB1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MOB1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MOB1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MOB1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MOB1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MOB1A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MOB1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MOB1A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MOB1A dans les cellules tumorales présentant une expression de MOB1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.