MMTAG2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-413147-LAC

C1orf35 codifica la proteina umana MMTAG2, un fattore ancora poco caratterizzato, per il quale stanno emergendo collegamenti con l’organizzazione nucleare e la regolazione trascrizionale. I dati disponibili di genomica funzionale suggeriscono che MMTAG2 possa influenzare programmi di espressione genica che coordinano le transizioni di stato cellulare, con un potenziale impatto sui percorsi di proliferazione e di risposta allo stress. Pattern di espressione alterati di C1orf35 sono stati riportati in diversi tipi di tumore e in screening di perturbazione, a supporto del suo impiego come modulatore della fitness cellulare dipendente dal contesto, più che come driver canonico. Definire le reti dipendenti da MMTAG2 può aiutare a chiarire come i processi associati alla cromatina plasmino l’identità di linea e fenotipi rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale MMTAG2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di C1orf35 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MMTAG2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione C1orf35, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MMTAG2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo C1orf35 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.