Plásmido CRISPR de Activación (h) MMTAG2: sc-413147-ACT

El gen humano C1orf35 codifica MMTAG2, una proteína escasamente caracterizada, con vínculos emergentes con la regulación mitocondrial y metabólica según anotaciones y perfiles de expresión en tejidos proliferativos. La evidencia actual sugiere que MMTAG2 podría participar en la homeostasis mitocondrial y en procesos de adaptación al estrés celular que influyen en la producción de energía y el equilibrio redox. La disfunción mitocondrial y la reprogramación metabólica son rasgos recurrentes en la biología del cáncer y en modelos de enfermedades neurodegenerativas, lo que convierte a C1orf35/MMTAG2 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de fenotipos asociados a la bioenergética. La investigación sobre este gen también respalda el mapeo de vías en contextos donde la señalización mitocondrial se cruza con el control del ciclo celular y la proteostasis.

MMTAG2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C1orf35 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MMTAG2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C1orf35 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C1orf35, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MMTAG2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C1orf35 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MMTAG2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MMTAG2 en células tumorales con expresión de C1orf35 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.