Plasmide CRISPR d'Activation (h) MMTAG2: sc-413147-ACT

Le gène humain C1orf35 code MMTAG2, une protéine encore mal caractérisée, dont les annotations et les profils d’expression dans des tissus prolifératifs suggèrent des liens émergents avec la régulation mitochondriale et métabolique. Les données actuelles indiquent que MMTAG2 pourrait contribuer à l’homéostasie mitochondriale et aux processus d’adaptation au stress cellulaire qui influencent la production d’énergie et l’équilibre redox. Des altérations de la fonction mitochondriale et une reprogrammation métabolique constituent des caractéristiques récurrentes en biologie du cancer et dans des modèles de maladies neurodégénératives, faisant de C1orf35/MMTAG2 une cible pertinente pour des études mécanistiques de phénotypes associés à la bioénergétique. Les travaux sur ce gène soutiennent également la cartographie des voies de signalisation dans des contextes où la signalisation mitochondriale s’entrecroise avec le contrôle du cycle cellulaire et la protéostasie.

MMTAG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C1orf35 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MMTAG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C1orf35 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C1orf35, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MMTAG2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C1orf35 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MMTAG2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MMTAG2 dans les cellules tumorales présentant une expression de C1orf35 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.