MMP9 Plasmide Double Nickase (m): sc-421679-NIC

La metalloproteinasi della matrice 9 (MMP9), codificata dal gene murino *Mmp9*, è un’endopeptidasi secreta dipendente dallo zinco che degrada componenti della matrice extracellulare e processa molecole bioattive per regolare il rimodellamento tissutale. L’attività di MMP9 interseca vie che controllano la migrazione dei leucociti, i gradienti di citochine e chemochine, l’angiogenesi e la riparazione delle ferite, ed è frequentemente studiata nel contesto della segnalazione infiammatoria e del turnover della matrice extracellulare. Nel microambiente tumorale e durante l’infiammazione cronica, un’espressione alterata di *Mmp9* può influenzare l’integrità della membrana basale, l’infiltrazione di cellule immunitarie e la permeabilità vascolare. La deregolazione di MMP9 è stata associata a modelli murini di progressione tumorale, artrite, neuroinfiammazione e rimodellamento fibrotico, rendendola un bersaglio comune per studi meccanicistici di fenotipi guidati dalla matrice.

MMP9 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mmp9 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mmp9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mmp9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mmp9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.