MMP-13 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400626-ACT

L’MMP13 umano codifica la metalloproteinasi della matrice 13 (MMP-13), un’endopeptidasi secreta zinco-dipendente che scinde i collagenei fibrillari e altri componenti della matrice extracellulare per coordinare il rimodellamento tissutale. L’attività di MMP-13 interagisce con il turnover della matrice extracellulare, la migrazione cellulare e la segnalazione infiammatoria, ed è regolata da programmi indotti da citochine che convergono su risposte trascrizionali legate a MAPK e NF-κB. Un’espressione deregolata di MMP13 è frequentemente associata a degradazione patologica della matrice e ad alterazioni della segnalazione stromale in contesti quali osteoartrosi, artrite reumatoide e rimodellamento del microambiente tumorale. In quanto effettore chiave del catabolismo del collagene, MMP-13 è ampiamente utilizzata come readout molecolare della degenerazione della cartilagine e di fenotipi invasivi negli studi meccanicistici.

MMP-13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MMP13 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MMP-13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MMP13 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MMP13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MMP-13. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MMP13 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MMP-13 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MMP-13 nelle cellule tumorali con espressione di MMP13 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.