Plasmide CRISPR d'Activation (h) MLL5: sc-403300-ACT

KMT2E code la méthyltransférase d’histones lysine MLL5, un régulateur associé à la chromatine qui influence des programmes transcriptionnels contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation hématopoïétique et l’engagement de lignée. Bien que son activité catalytique soit débattue par rapport à celle d’autres membres de la famille KMT2, MLL5 participe à la régulation épigénétique via des interactions avec la chromatine et des complexes transcriptionnels, modifiant le paysage des marques d’histones et la stabilité de l’expression génique. La dérégulation de KMT2E/MLL5 a été associée à des altérations des états de prolifération et de différenciation, et est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie myéloïde, du contrôle de la chromatine à l’échelle du génome et du remaniement transcriptionnel lié au cancer. Ces propriétés font de KMT2E un nœud utile pour disséquer les voies épigénétiques, les circuits transcriptionnels et les relations entre phénotype et expression dans les cellules humaines.

MLL5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KMT2E sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MLL5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KMT2E dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KMT2E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MLL5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KMT2E natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MLL5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MLL5 dans les cellules tumorales présentant une expression de KMT2E silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.