MLK3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401781-ACT

MAP3K11 kodiert die humane Mixed-Lineage-Kinase 3 (MLK3), eine MAP3K, die vielfältige upstream gelegene Stress- und Zytokinsignale an nachgeschaltete MAPK-Signalwege koppelt, darunter die JNK- und p38-Kaskaden. Durch die Phosphorylierung von MAP2Ks wie MKK4/7 und MKK3/6 trägt MLK3 zur Regulation von Transkriptionsprogrammen bei, die Entzündung, Apoptose, Zytoskelett-Remodelling und Zellmigration steuern. Die MLK3-Aktivität ist mit Signalnetzwerken verknüpft, die nachgeschaltet von kleinen GTPasen und Rezeptorwegen liegen und zelluläre Stressantworten sowie angeborene Immunantworten prägen. Eine fehlregulierte MAP3K11/MLK3-Signalgebung wurde mit pathologischen Kontexten in Verbindung gebracht, die eine aberrante MAPK-Aktivierung umfassen, darunter onkogene Signalanpassungen sowie neuroinflammatorische oder neurodegenerative Prozesse.

MLK3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAP3K11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MLK3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAP3K11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAP3K11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MLK3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAP3K11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MLK3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MLK3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAP3K11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.