Plásmido CRISPR de Activación (h) MKP-7: sc-405727-ACT

DUSP16 codifica la fosfatasa 7 de las quinasas activadas por mitógenos (MKP-7), una fosfatasa de doble especificidad que atenúa la señalización de MAPK al desfosforilar quinasas activadas por estrés, con una preferencia descrita hacia las vías de JNK y p38. Mediante el control por retroalimentación negativa de las cascadas MAPK, MKP-7 influye en programas transcripcionales dependientes del estímulo que regulan la proliferación, la diferenciación y la apoptosis. La actividad desregulada de DUSP16 se ha vinculado en la literatura con alteraciones en la señalización inflamatoria y con la remodelación de redes MAPK asociada a tumores, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la homeostasis de la vía. Como regulador citosólico de respuestas impulsadas por quinasas, MKP-7 se examina con frecuencia en contextos de señalización por citocinas, adaptación al estrés celular y crosstalk entre vías relacionadas con la inmunidad.

MKP-7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DUSP16 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MKP-7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DUSP16 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DUSP16, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MKP-7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DUSP16 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MKP-7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MKP-7 en células tumorales con expresión de DUSP16 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.