Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) MK: sc-402064-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)MK consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MK (h) y el plásmido de doble nickasa MK (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MDK. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MK Anticuerpo (A-9): sc-46701
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) MK | sc-402064-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) MK | sc-402064-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El MDK humano codifica midkina (MK), un factor de crecimiento secretado y de unión a heparina que modula la proliferación, la supervivencia y la migración celular, así como el crecimiento de neuritas. MK señaliza a través de múltiples socios en la superficie celular, incluidos la fosfatasa de tirosina de proteínas receptora β/ζ y miembros de la familia de proteínas relacionadas con el receptor de LDL, influyendo en vías posteriores como MAPK/ERK, PI3K/AKT y programas de señalización inflamatoria. La expresión de MDK está estrictamente regulada durante el desarrollo y con frecuencia se encuentra elevada en contextos de señalización oncogénica, estrés tisular y remodelación. La actividad desregulada de MK se ha asociado con la progresión tumoral, la angiogénesis, el reclutamiento de células inmunitarias y procesos fibróticos o neuroinflamatorios, lo que convierte a MDK en una diana útil para estudios mecanísticos de la señalización del microambiente.
MK El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MDK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MDK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MDK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MDK alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.