MK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421609

Descripción general

Mdk codifica midquina (MK), un factor de crecimiento secretado con unión a heparina que regula la proliferación, la supervivencia y la migración celular, así como el crecimiento de neuritas durante el desarrollo y la remodelación tisular. MK señaliza a través de proteoglicanos de la superficie celular y complejos de receptores para modular vías vinculadas a MAPK/ERK, PI3K/AKT y redes de quimiocinas inflamatorias, influyendo en la angiogénesis y en las interacciones con la matriz extracelular. En modelos murinos, la alteración de la expresión de Mdk se asocia con un reclutamiento desregulado de células inmunitarias y respuestas de reparación aberrantes, lo que resulta relevante para estudios de inflamación, fibrosis y señalización estromal asociada a tumores. MK también contribuye al establecimiento de patrones del sistema nervioso y a las respuestas a lesiones, lo que la convierte en un nodo útil para investigar procesos neuroinflamatorios y regenerativos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mdk en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mdk junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mdk tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mdk para la investigación de la señalización de MK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mdk críticos para la función de MK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mdk para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mdk. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MK (m) y el plásmido HDR MK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mdk para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mdk definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.