Plásmido Doble Nickase (m) mitoNEET: sc-424640-NIC

El gen murino **Cisd1** codifica **mitoNEET**, una proteína de unión a clústeres **[2Fe–2S]** anclada a la membrana mitocondrial externa que participa en la transferencia de clústeres hierro‑azufre, la regulación redox y la coordinación de la bioenergética mitocondrial con el estado metabólico celular. mitoNEET influye en la morfología mitocondrial y en la capacidad oxidativa, interactuando con vías que regulan el manejo de especies reactivas de oxígeno, la utilización de lípidos y la homeostasis del hierro. La desregulación de procesos asociados a **CISD1/mitoNEET** se ha vinculado en la literatura con disfunción metabólica, respuestas al estrés mitocondrial y fenotipos relevantes para la neurodegeneración, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de señalización mitocondrial. En modelos murinos, la perturbación de **Cisd1** puede aprovecharse para investigar cómo el control redox de la membrana mitocondrial externa moldea la fisiología celular en tejidos con alta demanda metabólica.

mitoNEET El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cisd1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cisd1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cisd1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cisd1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.