Mitofilin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429376

Descripción general

Mouse Immt codifica mitofilina, un componente central del complejo MICOS (sistema organizador de sitios de contacto mitocondriales y crestas) que mantiene la arquitectura de la membrana mitocondrial interna y la formación de las uniones de las crestas. La mitofilina sostiene la ultraestructura mitocondrial, coordina los contactos entre las membranas interna y externa e influye en la importación de proteínas y en la organización de la cadena respiratoria, aspectos importantes para la fosforilación oxidativa. La alteración de IMMT perturba la morfología de las crestas, la dinámica mitocondrial y la homeostasis bioenergética, procesos ampliamente implicados en la neurodegeneración, la cardiomiopatía, la disfunción metabólica y la adaptación de las células cancerosas. Como nexo del acoplamiento entre estructura y función mitocondrial, Immt se estudia con frecuencia en vías que regulan la sensibilidad a la apoptosis, la mitofagia y las respuestas celulares al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Mitofilin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Immt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Immt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Immt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Mitofilin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Immt para la investigación de la señalización de Mitofilin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Immt críticos para la función de Mitofilin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Immt para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Mitofilin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Mitofilin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Immt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Mitofilin (m) y el plásmido HDR Mitofilin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Immt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Immt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.