MIS CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400715-ACT

Anti-Müller-Hormon (AMH), auch bekannt als Müller-inhibierende Substanz (MIS), ist ein sezernierter Ligand der TGF-β-Superfamilie, der seine Signalwirkung hauptsächlich über AMHR2 und Typ-I-Rezeptoren entfaltet und dadurch eine SMAD1/5/8-abhängige Transkription aktiviert. In der menschlichen Entwicklung ist AMH/MIS für die männliche sexuelle Differenzierung essenziell, indem es die Rückbildung der Müller-Gänge fördert; im Erwachsenenalter trägt es zur Kommunikation zwischen Gonadenzellen und zur Regulation der Follikulogenese bei. Die AMH-Expression wird häufig als Marker für den Zustand von Sertoli- und Granulosazellen verwendet, wodurch sie mit der endokrinen Regulation und der Biologie reproduktiver Gewebe verknüpft ist. Eine Fehlregulation der AMH/MIS-Signalgebung oder -Expression wurde mit Störungen der Geschlechtsentwicklung, veränderten Phänotypen der ovariellen Reserve und der Biologie gonadaler Tumoren in Verbindung gebracht und unterstützt mechanistische Studien zu Entwicklungs- und Reproduktionssignalwegen.

MIS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AMH-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MIS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AMH-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AMH-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MIS-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AMH-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MIS-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MIS-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AMH-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.