Plasmide CRISPR/Cas9 KO MIP-1γ (m): sc-422849
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MIP-1γ Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MIP-1γ, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MIP-1γ Antibody (X-18): sc-74228
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MIP-1γ (m) | sc-422849 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ccl9 code la chimiokine CC MIP-1γ, un médiateur sécrété qui module le trafic des cellules de l’immunité innée en favorisant la chimiotaxie et l’activation de populations myéloïdes telles que les monocytes et les macrophages. La signalisation de MIP-1γ contribue aux réseaux de cytokines inflammatoires et aux programmes de recrutement des leucocytes, en interaction avec des réponses dépendantes de NF-κB et, plus largement, avec des cascades de signalisation via les récepteurs aux chimiokines. Dans les tissus murins, l’expression de Ccl9 est fréquemment associée à des états d’activation immunitaire et au remodelage du microenvironnement, ce qui en fait un marqueur utile pour l’étude de l’inflammation, de la défense de l’hôte et du dialogue entre cellules immunitaires. Des gradients de chimiokines dérégulés impliquant MIP-1γ sont pertinents dans des modèles de maladies inflammatoires chroniques, d’infection et d’inflammation associée aux tumeurs, où l’infiltration myéloïde influence la pathologie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MIP-1γ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccl9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccl9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccl9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MIP-1γ.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccl9 pour l'étude de la signalisation de MIP-1γ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ccl9 essentiels à la fonction de MIP-1γ
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccl9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MIP-1γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MIP-1γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccl9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MIP-1γ plasmide HDR (m) et le MIP-1γ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccl9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccl9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.