Mindin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417294

Übersicht

SPON2 kodiert Mindin, ein sezerniertes extrazelluläres Matrix-Glykoprotein, das als Mustererkennungs- und Adhäsionsmolekül fungiert und die angeborene Immunerkennung mit Zell–Matrix-Interaktionen verknüpft. Mindin bindet mikrobielle Komponenten und Integrinrezeptoren, unterstützt die Rekrutierung von Leukozyten, die Aktivierung von Makrophagen und die Modulation entzündlicher Signalwege wie NF-κB sowie nachgeschalteter Zytokinnetzwerke. In stromalen und vaskulären Mikroumgebungen trägt SPON2 zur Organisation der extrazellulären Matrix, zu chemotaktischen Gradienten und zu Gewebeumbauprozessen bei, die Tumor–Immun-Interaktionen beeinflussen. Eine dysregulierte SPON2-Expression wurde in mehreren entzündlichen und onkogenen Kontexten beschrieben, was es für mechanistische Studien zur Immunüberwachung, zum fibroseassoziierten Remodeling und zur Signalgebung in der Mikroumgebung relevant macht.

Das Mindin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SPON2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SPON2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SPON2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mindin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SPON2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mindin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SPON2-Exone abzielen, die für die Mindin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SPON2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Mindin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Mindin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SPON2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mindin HDR-Plasmid (h) und Mindin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SPON2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SPON2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.