Plásmido Doble Nickase (h) Mimitin: sc-410509-NIC

NDUFAF2 (Mimitin) es un factor de ensamblaje de la matriz mitocondrial necesario para la biogénesis adecuada del complejo I de la cadena respiratoria (NADH:ubiquinona oxidorreductasa). Al favorecer la maduración y estabilidad del complejo I, Mimitin contribuye a la fosforilación oxidativa, al mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial y al control del equilibrio redox celular, lo que influye en vías metabólicas y de respuesta al estrés. La alteración del ensamblaje del complejo I puede aumentar las especies reactivas de oxígeno y comprometer la producción de ATP, vinculando la disfunción de NDUFAF2 con la fisiopatología mitocondrial y con tejidos de alta demanda energética. Como regulador de la función mitocondrial codificado en el núcleo, NDUFAF2 se estudia con frecuencia en contextos de remodelación metabólica, control de calidad mitocondrial y mecanismos subyacentes a trastornos asociados al complejo I.

Mimitin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NDUFAF2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NDUFAF2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NDUFAF2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NDUFAF2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.