Plásmido CRISPR de Activación (h) MIC2L1: sc-417097-ACT

El CD99L2 humano codifica la glucoproteína de superficie celular MIC2L1, un miembro de la familia CD99 implicado en la adhesión intercelular y en el tráfico de leucocitos a través del endotelio vascular. MIC2L1 se asocia con procesos que modulan las interacciones endotelio–inmunidad, incluida la regulación de la dinámica de las uniones célula–célula y la migración transendotelial en contextos de señalización inflamatoria. La expresión alterada de moléculas de la familia CD99 se ha relacionado con un reclutamiento desregulado de células inmunitarias y con inflamación vascular, lo que convierte a CD99L2 en un objetivo relevante para estudiar la vigilancia inmunitaria, la función de barrera y las interacciones tumor–estroma. En entornos de investigación, CD99L2 se analiza con frecuencia en modelos de infiltración tisular inflamatoria y de señales del microambiente que influyen en la motilidad y la adhesión celulares.

MIC2L1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD99L2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MIC2L1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD99L2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD99L2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MIC2L1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD99L2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MIC2L1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MIC2L1 en células tumorales con expresión de CD99L2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.