Plásmido Doble Nickase (h) MIB1: sc-404769-NIC

MIB1 codifica la ligasa 1 de ubiquitina E3 Mindbomb, una ligasa E3 de tipo RING que ubiquitina ligandos de Notch como DLL1 y JAG1 para promover la endocitosis del ligando y la activación productiva del receptor Notch. Mediante la regulación de la amplitud y la temporalidad de la señalización de Notch, MIB1 influye en las decisiones de destino celular, la diferenciación y el patrón de los tejidos, con efectos posteriores sobre programas transcripcionales que controlan la proliferación y el compromiso de linaje. MIB1 también se interrelaciona con la homeostasis del sistema ubiquitina–proteasoma y con vías de tráfico endocítico que modulan la dinámica receptor–ligando en la superficie celular. La alteración genética y funcional de MIB1 se ha asociado con cambios en la señalización del desarrollo y con fenotipos relevantes para la enfermedad, incluidos contextos en los que la desregulación de la vía Notch contribuye a la biología oncogénica y cardiovascular.

MIB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MIB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MIB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MIB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MIB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.