MIA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404978
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MIA El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MIA, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MIA Anticuerpo (C-10): sc-377375
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MIA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404978 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La MIA (actividad inhibidora del melanoma) humana codifica una proteína secretada que interactúa con la matriz extracelular y que está implicada en la regulación de la adhesión celular, la migración y la remodelación tisular. MIA puede modular la señalización dependiente de integrinas y de la matriz, e influir en la dinámica del citoesqueleto que determina fenotipos invasivos y respuestas de estrés celular. Se ha descrito una expresión alterada de MIA en el melanoma y otras neoplasias malignas, donde con frecuencia se estudia como un mediador dependiente del contexto de las interacciones entre el tumor y el microambiente y del comportamiento metastásico. Como factor soluble, MIA también se utiliza para investigar la señalización paracrina y las dependencias de vías extracelulares en modelos celulares.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MIA (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MIA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MIA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MIA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MIA.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MIA para la investigación de la señalización de MIA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MIA críticos para la función de MIA
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MIA para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MIA CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MIA CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MIA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MIA (h) y el plásmido HDR MIA (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MIA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MIA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.