Plasmide CRISPR/Cas9 KO MGST2 (m): sc-431759

Présentation

La glutathion S-transférase microsomale 2 (MGST2), codée par le gène murin *Mgst2*, est une enzyme associée aux membranes qui conjugue le glutathion à des intermédiaires lipidiques réactifs et soutient la détoxification cellulaire en situation de stress oxydatif et inflammatoire. MGST2 participe au métabolisme des eicosanoïdes, notamment à la biosynthèse du leucotriène C4, ce qui la relie à des voies de signalisation dépendantes de l’acide arachidonique qui régulent le tonus vasculaire, la fonction plaquettaire et l’activation des cellules immunitaires. En modulant l’homéostasie redox et la production de médiateurs lipidiques, MGST2 peut influencer les réponses au stress mitochondrial et du réticulum endoplasmique (RE), l’intégrité membranaire et les programmes transcriptionnels pro-inflammatoires. Une détoxification dérégulée dépendante du glutathion et une signalisation des leucotriènes altérée sont pertinentes dans des modèles d’inflammation de type asthmatique, d’athérosclérose et de neuroinflammation, faisant de *Mgst2* une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux lipidiques inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MGST2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mgst2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mgst2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mgst2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MGST2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mgst2 pour l'étude de la signalisation de MGST2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mgst2 essentiels à la fonction de MGST2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mgst2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MGST2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MGST2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mgst2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MGST2 plasmide HDR (m) et le MGST2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mgst2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mgst2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.