Plasmide CRISPR/Cas9 KO mGluR-8a/b/c (m): sc-420695
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- mGluR-8a/b/c Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique mGluR-8a/b/c, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: mGluR-8 Antibody (4A7): sc-517124
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO mGluR-8a/b/c (m) | sc-420695 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Grm8 code le récepteur métabotropique du glutamate 8 (mGluR‑8a/b/c), un RCPG du groupe III qui se couple principalement aux protéines Gi/o afin de réduire l’activité de l’adénylate cyclase, de moduler la signalisation cAMP/PKA et de réguler la libération présynaptique de neurotransmetteurs. L’activité de mGluR8 influence la transmission synaptique et la plasticité en ajustant la fonction des canaux ioniques et la probabilité de libération vésiculaire, intégrant la signalisation glutamatergique à travers les circuits neuronaux. Chez la souris, Grm8 est étudié dans le contexte de l’équilibre excitation/inhibition et des mécanismes au niveau des circuits qui façonnent le traitement sensoriel, l’apprentissage et les comportements liés à la réponse au stress. Une signalisation dérégulée des récepteurs du glutamate, y compris des mGluR du groupe III, est fréquemment étudiée pour sa contribution à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques dans des modèles expérimentaux.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mGluR-8a/b/c (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Grm8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Grm8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Grm8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mGluR-8a/b/c.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Grm8 pour l'étude de la signalisation de mGluR-8a/b/c, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Grm8 essentiels à la fonction de mGluR-8a/b/c
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Grm8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le mGluR-8a/b/c plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le mGluR-8a/b/c plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Grm8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le mGluR-8a/b/c plasmide HDR (m) et le mGluR-8a/b/c (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Grm8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Grm8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.