Plasmide Double Nickase (h) mGluR-2: sc-403054-NIC

Le gène humain **GRM2** code le récepteur métabotropique du glutamate **mGluR‑2**, un GPCR de classe C qui se couple principalement aux protéines **Gi/o** pour inhiber l’activité de l’adénylate cyclase et moduler en aval la signalisation **AMPc/PKA**. mGluR‑2 agit comme un régulateur clé de la libération présynaptique des neurotransmetteurs et de la plasticité synaptique, en façonnant la transmission excitatrice via la modulation des canaux ioniques et de la machinerie de libération des neurotransmetteurs. Par ces mécanismes, **GRM2** contribue à l’homéostasie des réseaux neuronaux et à des programmes de signalisation dépendants de l’activité, pertinents pour l’apprentissage et la réponse au stress. Des altérations de la signalisation **GRM2/mGluR‑2** ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des dysfonctionnements des circuits glutamatergiques.

mGluR-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRM2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRM2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRM2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.