mGluR-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403054-ACT

GRM2 kodiert den menschlichen metabotropen Glutamatrezeptor 2 (mGluR-2), einen Gi/o-gekoppelten GPCR, der die synaptische Transmission moduliert, indem er die Adenylylcyclase-Aktivität hemmt, intrazelluläres cAMP senkt und die Leitfähigkeit von Ionenkanälen reguliert. mGluR-2 fungiert als präsynaptischer Autorezeptor und Heterorezeptor, um die Glutamatfreisetzung zu begrenzen und die neuronale Erregbarkeit innerhalb glutamaterger Schaltkreise zu formen. Über cAMP/PKA-, MAPK/ERK- und calciumabhängige Signalprozesse beeinflusst GRM2 synaptische Plastizität, das Gleichgewicht von Neurotransmittern und Netzwerkoszillationen. Eine fehlregulierte GRM2-Signalübertragung wurde mit der Biologie neuropsychiatrischer und neuroentwicklungsbedingter Erkrankungen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zu Schaltkreis-Dysfunktionen unterstützt.

mGluR-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GRM2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

mGluR-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GRM2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GRM2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen mGluR-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GRM2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von mGluR-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des mGluR-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GRM2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.