MGAT3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-415617-ACT

Humanes MOGAT3 (auch als MGAT3 bezeichnet) kodiert eine Monoacylglycerol-Acyltransferase, die die Acylierung von Monoacylglycerol zu Diacylglycerol katalysiert, einem zentralen Zwischenprodukt der Triglyceridbiosynthese. Diese enzymatische Aktivität verknüpft das Remodeling von Glycerolipiden mit übergeordneten Lipidstoffwechselnetzwerken, die die Membranzusammensetzung, die Bildung von Lipidtröpfchen und die zelluläre Energiespeicherung beeinflussen. Durch die Modulation von Diacylglycerol und nachgeschalteten Lipidpools kann MGAT3 mit Signalprozessen interagieren, die empfindlich auf lipidbasierte Second Messenger und metabolische Stressantworten reagieren. Eine veränderte Regulation des Glycerolipidstoffwechsels ist mit Phänotypen metabolischer Erkrankungen und für Dyslipidämie relevanten Signalwegen assoziiert, was MGAT3 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Lipidverarbeitung in humanen Zellen macht.

MGAT3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MOGAT3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MGAT3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MOGAT3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MOGAT3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MGAT3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MOGAT3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MGAT3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MGAT3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MOGAT3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.