Plásmido CRISPR de Activación (h) MGAT2: sc-406205-ACT

El MOGAT2 humano codifica MGAT2 (monoacilglicerol O-aciltransferasa 2), una enzima de membrana del retículo endoplásmico que cataliza la conversión de monoacilglicerol y acil‑CoA en diacilglicerol, un intermediario clave en la síntesis de triacilglicéridos. Esta actividad vincula la asimilación de lípidos de la dieta y el almacenamiento lipídico celular con rutas más amplias de homeostasis de glicerolípidos y de energía, influyendo en la formación de gotas lipídicas y en la composición de los lípidos de membrana. El flujo dependiente de MGAT2 puede modular la señalización aguas abajo mediante mediadores lipídicos derivados del diacilglicerol y se entrecruza con programas metabólicos que determinan el manejo de lípidos en tejido adiposo e hígado. La regulación alterada de MOGAT2/MGAT2 se ha asociado con fenotipos metabólicos que incluyen dislipidemia, sensibilidad a la insulina y procesos relacionados con hígado graso, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de fisiopatología impulsada por lípidos.

MGAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MOGAT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MGAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MOGAT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MOGAT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MGAT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MOGAT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MGAT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MGAT2 en células tumorales con expresión de MOGAT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.